收到細胞后，發(fā)現(xiàn)是培養(yǎng)瓶，第一次操作的束手無策，怎么辦？

 首先我們得弄明白我們得細胞是貼壁細胞還是懸浮細胞或者是半懸浮細胞,不明白的同學可以參考下圖哦：

   半懸浮半貼壁:

BV-2細胞

貼壁細胞：HCMEC/D3

   懸浮細胞：

THP-1

 

貼壁細胞請遵守以下準則：

細胞收到后，顯微鏡下觀察，有些細胞貼壁比較牢，它不會因為運輸問題有變化，收到后下顯微鏡下觀察細胞的密度，確定無污染，細胞無異常先放培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2個小時后，按照貼壁細胞消化順序消化：

一

貼壁細胞消化順序如下：

1.準備工作，胰酶、培養(yǎng)基、PBS各預(yù)熱10-15分鐘
1. 去上清，先用PBS清洗兩次

2.棄PBS后，加入1ml胰酶，前后左右輕輕搖勻后，超凈臺常溫放置3-5分鐘左右

3.顯微鏡下觀察細胞，若細胞變得橢圓透亮后，輕拍細胞瓶壁

4.顯微鏡下觀察細胞是否已經(jīng)脫落，要是沒有脫落繼續(xù)消化2分鐘后再輕輕拍打，95%以上細胞脫落請立即加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化

5.將消化下來的細胞懸液移入離心管離心，正常離心轉(zhuǎn)速：1000-1200轉(zhuǎn)，5分鐘

6.分瓶，第一次傳代建議1：2傳，或者傳代一瓶，凍存一支

二

懸浮細胞傳代規(guī)則：

1，收到細胞后穩(wěn)定一小時后，分兩個50ml的離心管對等離心1000轉(zhuǎn)5分鐘

2.棄上清，一管分2個T25瓶傳代，一管凍存

懸浮細胞傳代不需要每次都離心操作，建議每傳代2次離心操作一次，以去除細胞中的碎片

三

半懸浮半貼壁細胞消化要領(lǐng)：

1.收到細胞穩(wěn)定一小時后，懸浮細胞收集離心，貼壁細胞按照貼壁順序來消化即可

溫馨提示：

收到細胞請一定要仔細閱讀說明書，按照傳代步驟操作，請保持和商家一樣的培養(yǎng)方式，比如說，牛是吃草的，你想改善它的營養(yǎng)，也只能把草的質(zhì)量提高，千萬不能換成肉啊 ，不只貴還會把牛餓死。

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